Приготування та опис мікропрепаратів. Домашня мікроскопія

Тема:«Приготування та опис мікропрепаратів клітин рослин»

Ціль:переконатися у існуванні явища плазмолізу та деплазмолізу в живих клітинах рослин та швидкості проходження фізіологічних процесів.

Обладнання:методичні вказівки щодо виконання лабораторних, мікроскопи, цибулина цибулі, концентрований розчин NaCl, фільтрувальний папір, піпетки.

Теоретичні відомості:

Усі живі організми складаються із клітин. Всі клітини, крім бактеріальних, побудовані за єдиним планом. Оболонки клітин уперше побачив у 16 ​​столітті Р.Гук, розглядаючи зрізи рослинних та тваринних тканин під мікроскопом. Термін «клітина» утвердився в біології 1665 року.

Методи вивчення клітини різні, наприклад метод оптичної та електронної мікроскопії.

Перший мікроскоп був сконструйований Р. Гуком 3 століття тому, даючи збільшення до 200 разів. Світловий мікроскоп нашого часу збільшує до 300 разів і більше. Однак і таке збільшення недостатньо для того, щоби побачити клітинні структури. В даний час застосовують електронний мікроскоп, що збільшує предмети в десятки та сотні тисяч разів (до 10000000).

Основні положення сучасної клітинної теорії:

1. Структура. Клітина – це жива мікроскопічна система, що складається з ядра, цитоплазми та органоїдів.

2.Походження клітини. Нові клітини утворюються шляхом поділу раніше існуючих клітин.

3.Функції клітини. У клітці здійснюються:

Метаболізм (сукупність повторюваних, оборотних, циклічних процесів – хімічних реакцій);

Оборотні фізіологічні процеси (надходження та виділення речовин, дратівливість, рух);

Необоротні хімічні процеси (розвиток).

4.Клітка та організм. Клітина може бути самостійним організмом, який здійснює всю повноту життєвих процесів. Усі багатоклітинні організми складаються з клітин. Зростання та розвиток багатоклітинного організму – наслідок зростання та розмноження однієї або декількох вихідних клітин.

5. Еволюція клітини. Клітинна організація виникла на зорі життя та пройшла тривалий шлях розвитку від без'ядерних форм до ядерних одноклітинних та багатоклітинних організмів.

Хід роботи:

1. 
   Зніміть нижню шкірку луски цибулі (4мм2);
2. 
   Приготуйте мікропрепарат, розгляньте і замалюйте 4-5 клітинок побаченого;
3. 
   З одного боку покривного скла нанесіть кілька крапель розчину кухонної солі, а з іншого боку смужкою фільтрувального паперу відтягніть воду;
4. 
   Розгляньте мікропрепарат протягом кількох секунд. Зверніть увагу на зміни, що відбулися з мембранами клітин і час, за який ці зміни відбулися. Замалюйте об'єкт, що змінився;
5. 
   Нанесіть кілька крапель дистильованої води біля краю покривного скла і відтягніть її з іншого боку фільтрувальним папером, змиваючи плазмолізуючий розчин;
6. 
   Протягом кількох хвилин розглядайте мікропрепарат під мікроскопом. Відзначте зміни положення мембран клітин та час, за який ці зміни відбулися. Замалюйте об'єкт, що вивчається,
7. 
   Зробіть висновок відповідно до мети роботи, відзначивши швидкість плазмолізу та деплазмолізу. Поясніть різницю у швидкості цих двох процесів.
8. 
   Дайте визначення термінам – плазмоліз, деплазмоліз, осмос, тургор.
9. 
   Поясніть, чому у варення яблука стають менш соковитими?

Лабораторна робота №3

Тема:«Порівняння будови клітин рослин та тварин за готовими мікропрепаратами»

(Час виконання роботи 45 хвилин)

Ціль:закріпити вміння працювати з мікроскопом, знаходити особливості. будови клітин рослин, тварин, порівнювати їх між собою.

Обладнання:методичні вказівки щодо виконання лабораторних, мікроскопи, готові мікропрепарати.

Хід роботи

Завдання 1.Розгляньте під мікроскопом мікропрепарати рослинних клітин та клітин тварин.

Завдання №2.Порівняйте будову клітин рослин, тварин. Заповніть таблицю 1.

Таблиця 1 «Будова клітин рослин та тварин»

Рис.1 Будова рослинної та тваринної клітини.

Завдання3.Дайте відповідь на питання:

У чому полягає схожість та відмінність клітин?

Які причини подібності та відмінності клітин різних організмів?

Спробуйте пояснити, як йшла еволюція бактерій, грибів, рослин та тварин?

Завдання 4.Зробіть висновок щодо роботи.

Лабораторна робота №4

Тема:«Виявлення та опис ознак подібності зародків людини та інших хребетних як доказ їхньої еволюційної спорідненості»

(Час виконання роботи 45 хвилин)

Ціль:виявити ознаки подібності зародків людини та інших ссавців як доказ їхньої еволюційної спорідненості.
Обладнання:методичні вказівки щодо виконання лабораторних, таблиця «Доказ спорідненості зародків людини та інших ссавців»

Теоретичні відомості:

Утворення статевих клітин, гаметогенез подібний у всіх багатоклітинних організмів, і всі організми розвивалися з однієї диплойдної клітини (зіготи). Це свідчить про єдність світу живих організмів.

У 20-х роках минулого століття вчений-ембріолог Карл Бер зробив запис у своєму щоденнику. «У мене є 2 маленькі ембріони у спирті, для яких я забув підписати назву, і я тепер уже не в змозі визначити клас, до якого вони належать. Це можуть бути ящірки, маленькі пташки або зовсім молоді ссавці».

У 1928 році Карл Бер чітко сформулював цю особливість як «закон зародкової подібності»: чим більш ранні стадії індивідуального розвитку досліджуються, тим більше подібності можна знайти між різними організмами». Пізніше Чарльз Дарвін використав це положення для обґрунтування єдності походження хребетних тварин.
Зв'язок між індивідуальним та історичним розвитком організму висловили німецькі вчені Геккель та Мюллер. У 2 половині 19 століття Геккель і Мюллер встановили закон онтогенезу та філогенезу, який отримав назву біогенетичного закону. Індивідуальний розвиток особини (онтогенез) коротко повторює історичний розвиток виду. У процесі зародкового розвитку повторюються багато рис будови предкових форм - на ранніх стадіях повторюються ознаки більш віддалених предків, але в пізніх стадіях - близьких предків (більш споріднених сучасних форм). Вивчаючи ембріологію, можна зробити більш загальний висновок. У процесі індивідуального розвитку (онтогенезу) ембріони послідовно повторюють риси будови предкових форм (тобто. онтогенез є коротке повторення філогенезу). Так, всі багатоклітинні організми проходять у своєму розвитку одноклітинну стадію, що передбачає походження багатоклітинних від одноклітинних. Далі слідує стадія одношарового "кулі" - їй відповідає будова деяких сучасних колоніальних найпростіших. Це - прямий натяк на можливий механізм появи багатоклітинності - клітини, що діляться, не розходилися, а залишалися поруч; ймовірно, надалі ці клітини почали виконувати різні функції. Наступна стадія, яку проходять усі тварини – це двошаровий "мішок". Цій стадії відповідає будова сучасних кишковопорожнинних (наприклад, гідри).

Личинки – ранні стадії розвитку деяких тварин. І іноді, тільки цікавлячись будовою личинок, можна правильно встановити родинні зв'язки між організмами. Так, асцидій - морських м'якотілих тварин-фільтраторів, що ведуть прикріплений спосіб життя, при першому розгляді не можна назвати хордовими тваринами. Їх і вважали довгий час безхребетними. Вважали, доки не простежили розвиток тварини від вільно плаваючої личинки до дорослого організму. Тут-то і виявилося, що личинка має ясно виражену хорду, порожнисту нервову трубку зі спинного боку тіла і двосторонню симетрію. І, отже, тварина це належить до типу хордових і має родинні зв'язки швидше з ланцетником - визнаним примітивним хордовим.

Рис.3Асцидія

Гомологічними називають органи, подібні за загальним планом будови, за своїми взаєминами з оточуючими органами і тканинами, по ембріональному розвитку та, нарешті, з іннервації та кровопостачання (можуть виконувати різні функції). Передній ласт тюленя, крило кажана, передня лапа кішки, передня нога коня та рука людини гомологічні один одному, хоча на перший погляд вони несхожі та пристосовані до виконання абсолютно різних функцій. Всі ці органи мають майже однакову кількість кісток, м'язів, нервів і кровоносних судин, розташованих по тому самому плану, і шляхи їх розвитку дуже подібні. Наявність гомологічних органів хоча б і пристосованих для виконання абсолютно неподібних функцій, служить вагомим доказом на користь загального походження організмів, що володіють ними.

Аналогічні органи – це органи, виконують одну функцію, але мають часом різну будову.

Наприклад, крило метелика та птиці.

Хід роботи.

Завдання 1.Порівняйте стадії розвитку зародків. Чи є схожість? У чому вони виявляються? Опишіть їх.

Рис.4 Особливості розвитку зародків різних стадіях.

Завдання 3.Виконайте тест на тему.

1. Людина у системі органічного світу:

а) є особливий загін класу Ссавці;

б) виділяється у особливе царство, що включає найбільш високоорганізовані живі істоти;

в) представляє особливий вид, який входить до загону Примати, клас Ссавці, царство Тварини

г) є складовою людського суспільства і не має відношення до системи органічного світу

2. Людину відносять до класу Ссавці, оскільки в неї:

а) внутрішнє запліднення;

б) легеневе дихання;

в) чотирикамерне серце

г) є діафрагма, потові та молочні залози

3. У людини у зв'язку з прямоходінням відбулися зміни у будові стопи:

а) сформувалося склепіння;

б) пазурі майже перетворилися на нігті;

в) зрослися фаланги пальців;

г) великий палець протиставлений решті

4. Про походження людини від ссавців свідчить:

а) розвинене мислення у ссавців;

б) подібна будова всіх систем органів, розвиток зародків;

в) харчування рослинною та тваринною їжею;

г) суспільний спосіб життя ссавців

5. На відміну від людиноподібних мавп у людини:

а) є резус-фактор;

б) виникла розумова діяльність;

в) є чотирикамерне серце;

г) розвинене абстрактне мислення.

Запишіть номери у порядку підвищення ієрархічності становища людини у царстві тварин:

1Тварини

3Ссавці

4Вузьконосі

5Люди (Hominida)

6Плацентарні

7Розумний (sapiens)

8Хребетні (Черепні)

9Людина (homo)

10 Багатоклітинні

11Хордові

12Людиноподібні

(Відповідь7,9, 5, 12, 4, 2, 6, 3, 8, 11, 1, 10)

Завдання 4. Зробіть висновки про ознаки подібності зародків людини та інших ссавців як доказ їхньої спорідненості.

Лабораторна робота №5

Тема:«Складання найпростіших схем моногібридного та дигібридного схрещування»

(Час виконання роботи 45 хвилин)

Варіант 1

Ціль:

Теоретичні відомості:

Хід роботи:

Завдання 1.Згадайте та запишіть у зошиті що називається моногібридним та дигібридним схрещуванням.

Завдання 2.Запишіть перший закон Менделя

Завдання3.Розв'яжіть запропоновані завдання.

Завдання №1

Рівномірне фарбування кавунів успадковується як рецесивна ознака. Яке потомство вийде від схрещування двох гетерозиготних рослин із смугастими плодами?

Завдання №2

Людина ген довгих вій домінує над геном коротких вій. Жінка з довгими віями, у батька якої вії були короткими, вийшла заміж за чоловіка з короткими віями.

З'ясуйте:
1) Скільки типів гамет утворюється у жінки?
2) Скільки типів гамет утворюється у чоловіка?
3) Яка ймовірність народження у цій сім'ї дитини з довгими віями?

5) Скільки різних фенотипів може бути у дітей у цій сім'ї?

Завдання №3

При схрещуванні двох сортів томату з червоними кулястими та жовтими грушоподібними плодами у першому поколінні всі плоди кулясті, червоні. Визначте генотипи батьків, гібридів першого покоління, співвідношення фенотипів другого покоління (червоний колір і куляста форма домінантна ознака).
Лабораторна робота №5

Тема: «Складання найпростіших схем моногібридного та дигібридного схрещування»

(Час виконання роботи 45 хвилин)

Варіант 2

Ціль:Навчитися складати найпростіші схеми моно- та дигібридного схрещування на основі запропонованих даних.

Теоретичні відомості:

Генотип – сукупність спадкової інформації, закодованої у генах.

Фенотип – кінцевий результат прояви генотипу, тобто. сукупність всіх ознак організму, що сформувалися в процесі індивідуального розвитку в умовах середовища.

Мінливість - здатність організму змінювати свої ознаки та властивості. Розрізняють мінливість фенотипічну (модифікаційну) та генотипічну, до якої належать мутаційна та комбінативна (в результаті гібридизації).

Норма реакції – межі модифікаційної мінливості цієї ознаки.

Мутації – це зміни генотипу, викликані структурними змінами генів чи хромосом.

Хід роботи:

Завдання 1.Згадайте і запишіть у зошиті що називається домінантною ознакою та геном.

Завдання 2.Запишіть другий закон Менделя.

Завдання 3.Розв'яжіть запропоновані завдання.

Завдання №1

У людини ген полідактилії (багатопалості) домінує над нормальною будовою кисті. У дружини кисть нормальна, чоловік гетерозиготний за геном полідактилії. Визначте ймовірність народження у цій сім'ї багатопалої дитини.

Завдання №2

Ген діабету рецесивний по відношенню до гена нормального стану. У здорового подружжя народилася дитина, хвора на діабет.

Визначте:
1) Скільки типів гамет може утворитися у батька?
2) Скільки типів гамет може утворитися у матері?
3) Яка ймовірність народження здорової дитини в цій сім'ї?
4) Скільки різних генотипів може бути у дітей у цій сім'ї?
5) Яка ймовірність того, що друга дитина народиться хворою?

Завдання №3

У людини карі очі домінують над блакитними, володіючи правою рукою над володінням лівою. Яке потомство можна очікувати від кариглазої шульги і блакитноокого правші якщо обидва батьки гетерозиготні за домінантною ознакою?

Лабораторна робота №6

Міністерство освіти та науки РФ

Державний освітній заклад вищої професійної освіти

«Шадрінський державний педагогічний інститут»

Кафедра природничих дисциплін з методикою викладання

Способи приготування мікропрепаратів з біології

Курсова робота

за спеціальністю 050102 «Біологія»

Виконавець:

Горшкова Катерина Андріївна

Студентка 3 курсу денного відділення

Науковий керівник:

Кандидат біологічних наук, доцент

Шарипова Надія Володимирівна

_________________________________

Оцінка __________________________

Шадрінськ

2014

Вступ ………………………………………………………………………….3

§ 1. Характеристика мікропрепаратів та їх використання ………………….4

§ 2. Обладнання, необхідне виготовлення мікропрепаратів …….7

§ 3. Підготовка матеріалу для приготування мікропрепаратів …………...12

§ 4. Способи приготування мікропрепаратів ……………………………….17

Висновок ………………………………………………………………………31

Бібліографічний список …………………………………………………….32

Додаток ……………………………………………………………………...34

Вступ

актуальність теми дослідження. Мікропрепарати є наочним засобом навчання і тому їх широко використовують на уроках біології під час лабораторних занять, щодо нового матеріалу, узагальненнях, зіставленнях та опитуванні.

У зв'язку з недостатнім забезпеченням кабінетів біології готовими мікропрепаратами, які необхідні кращого вивчення предмета, їх можна виготовити самостійно.

З актуальності, ми вибрали таку тему дослідження: «Способи приготування мікропрепаратів з біології».

Об'єктом дослідженняє мікропрепарати.

Предмет способи приготування мікропрепаратів.

Мета дослідження: вивчити види мікропрепаратів з біології та способи їх приготування

Завдання дослідження:

1. Вивчити та проаналізувати літературу з цієї теми.
2. Дати характеристику мікропрепаратів та поради щодо їх використання на уроках біології.
3. Описати обладнання, необхідне приготування мікропрепаратів.
4. Навчитися готувати матеріал для виготовлення мікропрепаратів.
5. Вивчити способи виготовлення мікропрепаратів.

Для реалізації цілей та завдань використовували такіметоди дослідження:аналіз науково-методичної літератури на тему дослідження, дослідно-пошукова робота та узагальнення її результатів.

Структура курсової роботи. Курсова робота складається з вступу, 4 параграфів та висновків, представлений бібліографічний список, що включає 16 джерел, 1 додаток.

§ 1. Характеристика мікропрепаратів та їх використання

До натуральних препарованих посібників належать гербарії, вологі препарати, мікропрепарати.

Мікропрепарат являє собою тонкий зріз органу живого організму або мікрочастинку, укладений у прозорий бальзам (імерсійне масло) або висушений, поміщений між двома стеклами (предметним та покривним).

Походження мікропрепаратів бере початок у використанні слонової кістки або звичайної кістки як підставка під зразки, які поміщалися між дисками прозорої слюди. Подібна конструкція була популярна у вікторіанській Англії, поки Королівське Мікроскопічне Товариство не представило стандартизоване предметне скло для мікроскопа.

Мікропрепарати дозволяють демонструвати внутрішню клітинну будову організмів, що допомагає формуванню у знань про єдину клітинну будову організмів. Мікропрепарати можна розділити на дві групи:

• постійні, виготовлені фабричним шляхом спеціально для навчання;
• тимчасові, приготовані учителем для уроку чи уроці самими школярами одноразового користування.

Постійні мікропрепарати є найтоншими зрізами тканин організмів, їх органів. Клітини здебільшого не мають забарвлення і тому, навіть за великого збільшення мікроскопа, буває важко розглянути внутрішньоклітинні структури, зокрема ядро. У зв'язку з цим клітинні мікропрепарати фарбують спеціальними барвниками для надання їм більшої наочності. Вчителям обов'язково треба попереджати дітей про те, що колір не є природним для мікроструктур. Використовують їх щодо нового матеріалу, узагальненнях, зіставленнях і опитуванні.

Тимчасові препарати називаються тому, що не зберігаються довго. Після ознайомлення з мікрооб'єктом тимчасовий препарат змивається із предметного скла. Приготування мікропрепарату - один із обов'язкових видів умінь, що формуються в курсі біології, починаючи з 6 класу.

Для вивчення живих клітин мікроорганізмів застосовують препарати "роздавлена ​​крапля", "висяча крапля", "відбиток", "агарова плівка" ("мікрокультура"). Препарати живих клітин розглядають із “сухими системами” мікроскопа. Препарати, робота з якими вже закінчена, перш ніж вимити, витримують у дезінфікуючому розчині.

Мікропрепарати дозволяють проводити широкий ряд дослідів, передбачених програмою шкільного курсу біології. Вони призначені докладного вивчення мікроскопічних структур під мікроскопом.

Викладач до роботи з мікропрепаратом повинен чітко пояснити учням, що вони мають побачити, використовуючи таблиці, малюнки, схеми тощо.

Під час опитування викладачі нерідко використовують «німі» (без етикеток) мікропрепарати. Учням дається завдання визначити мікропрепарати, розповісти про будову тієї чи іншої тканини. Доцільно зберігати однакові мікропрепарати в одному впакуванні, щоб можна було швидко роздати їх учням.

Мікропрепарати зберігають далеко від опалювальних приладів і так, щоб предметне скло знаходилося в горизонтальному положенні для запобігання «сповзанню» мікропрепарату.

Вимоги до мікропрепаратів:

1. Скло повинно бути безбарвним і прозорим. Покривне скло має бути тоншим за предметне, яке служить основою виробу.
2. Мікропрепарат може бути центрований, тобто. розташований у середині покривного скла. Розташування дуже дрібного об'єкта має бути позначене рамкою.
3. Мікроскопічні зрізи повинні бути дуже тонкими та мати всі необхідні для вивчення елементи.
4. Окремі тканини мікропрепарату мають бути пофарбовані яскравим стійким барвником.
5. Мікропрепарати повинні випускатися у вигляді набору для кожного розділу курсу біології. Кількість однойменних препаратів у наборі має бути достатньою для проведення лабораторної роботи всіма учнями у класі (15-20 шт.).
6. До набору мікропрепаратів повинні бути додані методичні рекомендації, де мають бути наведені малюнки мікрооб'єктів, що вивчаються, і завдання для самостійної роботи учнів.

Вивчення мікропрепаратів у процесі навчання залучає до методів науки, дає можливість шляхом безпосереднього спостереження побачити будову організмів, їх частин.

Мікропрепарати є мікроскопічно малі живі об'єкти, найтонші зрізи їх органів і частин. Ці об'єкти укладені між покривним та предметним склом у спеціальному розчині. Для кращої помітності препарати фарбують, тому забарвлення об'єктів штучне.

1. Для початку роботи з мікропрепаратом потрібно записати його назву, тему лабораторного заняття.

2. Вивчення будь-якого мікропрепарату починають із розгляду під мікроскопом при малому збільшенні (56х). Потім вибирають місце, де деталі краще видно, і ставлять велике збільшення (120-300х) і приступають до замальовки. При замальовці мікропрепарату треба дотримуватися співвідношення розмірів окремих частин оригіналу. Замальовка допомагає краще запам'ятати та створити зорове уявлення про об'єкт.

3. Спочатку малюнку позначають основні елементи, потім доповнюють деталями. Під малюнком підписують назву мікропрепарату та збільшення, при якому виконано малюнок. На одній сторінці учнівського зошита роблять 2-3 малюнки. Основні структури мікропрепарату позначають покажчиками і навпроти кожної пишуть цифру з подальшим розшифруванням. Контур поля зору мікроскопа не позначають.

Таким чином, існує 2 види мікропрепаратів - тимчасові та постійні. Їхня відмінність полягає в часі зберігання та способах приготування. Мікропрепарати повинні відповідати певним вимогам, які необхідно ретельно дотримуватись. Для приготування мікропрепаратів необхідне спеціальне обладнання, описане в наступному параграфі.

§ 2. Обладнання, необхідне приготування мікропрепаратів

Робочий стіл.

За відсутності спеціального столу з успіхом може бути пристосований будь-який стіл (бажано з ящиками) з площею робочої поверхні щонайменше 60*120см.

Якщо кришка столу немає спеціального покриття, його слід зробити з будь-якого вологостійкого матеріалу. Однак ділянку столу, призначену для безпосередньої роботи з приготування препаратів, у будь-якому випадку необхідно накрити склом і розташувати під ним невеликі (9*12см) листи білого або чорного паперу. Цим створюється відповідне тло, що полегшує роботу з забарвленими (білий лист) і не забарвленими (чорний лист) об'єктами. Рекомендується також на обидва аркуші нанести контури предметного скла з позначенням місця розташування та розмірів покривного скла.

Для того, щоб зручніше розташувати необхідне обладнання, слід мати двоярусну полицю для реактивів, розчинів і посуду, яка встановлюється або перед працюючим (вздовж заднього краю столу), або збоку в залежності від розташування столу щодо джерела світла.

Лабораторний посуд.

Широкогорлі банки з притертими пробкамирізної місткості від 50 до 200 мл використовують для складання гістологічних батарей, призначених для підготовки шматочків тканин до заливання різними середовищами. Найбільші банки застосовують для фіксації та зберігання шматочків тканин у фіксуючих рідинах, обробки предметного скла, приготування нейтрального формаліну та ін.

У місце банок з притертими пробками можна використовувати невеликі господарські банки з бляшаними кришками, що загвинчуються, різного обсягу.

Бюкси Невеликі круглі скляні стаканчики різного діаметру та висоти з шліфованими кришками.

Біологічні стаканчикикруглі, овальні або чотирикутні (як і високі бюкси) застосовують для проведення гістологічних зрізів, монтованих на предметних стеклах. Для надання стійкості та забезпечення порядку у розстановці їх поміщають у спеціальні стійки, виготовлені з дерева або пластмаси, по кілька штук у ряд залежно від методики обробки.

Чашки Петрі широкі, плоскі скляні чашки з кришками придатні для різних маніпуляцій (забарвлення вільно плаваючих і наклеєних на предметні скла зрізів, використання як підставок під бюкси і т.д.).

Мірний посуд циліндри та мензурки різної ємності (від 10 до 250-500 мл) воронки різних розмірів.

Хімічні стаканчикикруглі скляні стаканчики без кришок місткістю 50-100 мл знаходять широке застосування при проведенні гістохімічних реакцій, фарбування зрізів наклеєних на скло і т.д.

Колби (плоскодонні) місткістю від 50 мл до 2 л. Малі колби застосовують для приготування та зберігання розчинів різних барвників, великі під дистильовану воду та інші рідини, що витрачаються у великих кількостях.

Піпетки звичайні (призначені для закапування ліків) використовують для накопування на зрізи барвників та різних рідин, градуйовані (місткістю 0,1-100 мл) застосовують для відмірювання малих кількостей різних рідин. Можна використовувати в даний час автоматичні піпетки різної місткості, що широко використовуються.

Предметне склопрямокутні пластини розміром 76*25 мм товщиною 1,2-1,4 мм, призначені для розміщення зрізів у процесі приготування мікропрепаратів. Товстіші скла не дозволяють отримати різке зображення країв діафрагми освітлювача в площині препарату, так як воно виявляється в товщі скла, а це порушує фокусування конденсора і різко знижує чіткість зображення.

Покривне склоявляють собою тонкі (0,15-0,17 мм товщини, товстіші скла погіршують якість зображення) платівки різних розмірів. Служать для покриття оброблених зрізів, розміщених на предметному склі. Розміри покривного скла вибирають залежно від площі об'єкта.

Інструменти.

Інструменти, що використовуються в гістологічній лабораторії, включають пінцети, скальпелі, кровоспинні затискачі, корнцанг, бактеріологічні петлі шпателі, препарувальні голки - прямі і вигнуті, металеві і скляні. Скляні голки необхідні при імпрегнації сріблом, коли металеві голками користуватися не можна.

Також необхідно мати спиртування, волосяний пензлик для зняття зрізів з мікротомного ножа, фільтрувальний папір, голки, нитки, щільний папір для етикетування матеріалу, лейкопластир і олівець по склу.

Підготовка предметного скла.

Предметне скло, що застосовується для отримання гістологічних препаратів, необхідно попередньо підготувати. Виняток становлять готові до використання та спеціально упаковані імпортні предметні стекла.

Предметні стекла миють у теплій мильній воді або кип'ятять 15 хвилин у 2-3% розчині гідрокарбонату натрію, потім обполіскують гарячою водою і промивають протягом декількох годин у проточній воді. Вимите скло протирають чистою бавовняною тканиною і на кілька днів поміщають у 96 % спирт. Знежирене скло витягають пінцетом з цієї суміші, протирають чистою тканиною і складають у коробочку.

Предметне скло також добре знежирюється в міцному розчині соляної кислоти. Через кілька діб їх промивають проточною водою та висушують.

Якість знежирення можна перевірити, капнувши на предметне скло воду з піпетки: знежиреним склом вода розтікається тонким шаром, а не збирається в краплю.

Для кращої фіксації зрізів на склі його змащують попередньо сумішшю білка з гліцерином. Свіжий яєчний білок збивають і фільтрують через пористий фільтр, змочений дистильованою водою, потім розмішують з рівним об'ємом гліцерину і додають кілька кристалів тимолу. Суміш зберігається протягом кількох місяців. Застосовують також суміш, до складу якої входять 15 мл сироватки крові, 5 мл дистильованої води та 6 мл 5%-ного формаліну. Після фільтрації суміш готова до нанесення на предметне скло. Її використання дає кращі результати, ніж застосування яєчного білка, оскільки при фарбуванні фон не утворюється.

Для нанесення білка на знежирене предметне скло в одну руку беруть 5-6 стекол у вигляді віяла, а в іншу чисту скляну паличку, якою наносять білок, торкаючись кожного скла. Потім білок розтирають знежиреним спиртом пальцем поверхнею скла до його середини, докладаючи невелике зусилля. Деякі автори рекомендують натерте білком скло прогрівати в термостаті, але досвід показує, що це зайве, тому що після перенесення зрізів на скло їх поміщають у термостат або на спеціальний столик для просушування, де одночасно відбувається коагуляція білка.

Розроблено спосіб фіксації зрізу до предметного скла без попереднього натирання останнього білком з гліцерином.

У ванну з теплою дистильованою водою капають кілька крапель рідкого казеїнового клею і перемішують. В отриману каламутну рідину опускають зрізи, розправляють препарувальною голкою і виловлюють на знежирене чисте скло.

Цей спосіб дає незмінно хороший ефект і навколо зрізу немає пофарбованого тла, як це часто буває при застосуванні білка.

Таким чином, для приготування мікропрепаратів потрібне спеціальне обладнання та інструменти. Основними з них є предметне та покривне скло. Перш ніж почати готувати мікропрепарат, необхідно правильно підготувати предметне скло. До зберігання також пред'являються спеціальні вимоги. Але підготовки одного обладнання мало для приготування мікропрепаратів, потрібно також підготувати матеріали для дослідження. Докладно про це йдеться у наступному параграфі.

§ 3. Підготовка матеріалу для приготування мікропрепаратів

Мікропрепарати поділяються на тимчасові та постійні. Підготовка матеріалу для тимчасових препаратів включає фіксацію та фарбування.

Фіксація - це процес швидкої консервації клітинних структур, при якому всі фізіолого-біохімічні процеси зупиняються, а водорозчинні речовини переходять у нерозчинний стан. Отже, фіксація дозволяє зберегти внутрішньоклітинні структури у постійному вигляді тривалий час. Однак при фіксації в клітинах можуть з'являтися артефакти нові структури, які відсутні в живій клітині, наприклад, різноманітні вакуолі. Для запобігання появі артефактів необхідно використовувати спеціально підібрані хімічні розчини фіксатори, а сама фіксація повинна проводитися в певних умовах. Зокрема бажано використовувати охолоджені фіксатори (до 2-3 градусів); для фіксації потрібно брати окремі клітини або шматочки тканин не товщі за 5мм; об'єм фіксатора повинен перевищувати об'єм фіксованого матеріалу в 50-100 разів; фіксатор не повинен використовуватись для тривалого зберігання матеріалу; фіксатор не слід використовувати повторно.

Розглянемо склад і застосування найпоширеніших фіксаторів.

Формалін (формальдегід, або мурашиний альдегід). Найпростіший і найпоширеніший фіксатор. Застосовується як водних розчинів з концентрацією 4-10 %, у своїй за 100 % приймається концентрація продажного формаліну. Продажний формалін містить домішку мурашиної кислоти, яку нейтралізують за допомогою вуглекислого кальцію протягом 24 годин. Час фіксації від 1 до 24 годин. Для тривалого зберігання матеріал переносять у свіжий 10% формалін. Чистий формалін використовують у тому випадку, якщо планується подальше вивчення локалізації та активності ферментів. Найчастіше формалін включається до рецептури складніших фіксаторів.

Спиртові фіксатори. Містять етиловий або метиловий спирт. Водні розчини спиртів у чистому вигляді (70%, 96% чи 100%) використовуються відносно рідко. Найчастіше застосовують 100% спирти, які змішують з іншими речовинами. Потрібно мати на увазі, що метиловий спирт (метанол) і його пари отруйні.

Як універсальні фіксатори використовують різні композиції на основі формаліну, спиртів, органічних кислот і неорганічних речовин.

Оцтовий алкоголь (ацеталкоголь). Це один із найпростіших фіксаторів. Складається з 3 частин абсолютного спирту (етилового, а краще метилового) і 1 частини крижаної оцтової кислоти. Для приготування 100% (абсолютного) спирту вихідні спирти зневоднюють. Для зневоднення етилового спирту (етанолу) використовують безводний сульфат міді, а для зневоднення метилового спирту (метанолу) використовують оксид кальцію. Зберігають їх у герметичному посуді. Потрібно мати на увазі, що всі абсолютні спирти особливо отруйні. Для приготування крижаної оцтової кислоти вихідну концентровану кислоту охолоджують у холодильнику; при цьому кислота замерзає раніше, ніж вода. Рідину зливають, а замерзлу кислоту розморожують і використовують для приготування фіксатора. Фіксатор готовий для вживання через 24 години. Зберігати фіксатор у темному холодному місці. Час фіксації 2...24 години. Потім матеріал переносять у свіжий фіксатор, в якому може зберігатися до 1 місяця в холодильнику. Для більш тривалого зберігання матеріал переносять у 70%-ний спирт.

Фіксатор Карнуа. Склад абсолютний спирт 10 см 3 ; хлороформ | 3 см 3 ; оцтова кислота 1 см 3 . Термін фіксації 1-3 години.

Фіксатори, що містять пікринову кислоту, наприклад, суміш Буена 15 мл насиченого водного розчину пікринової кислоти: 5 частин формаліну: 1 частина крижаної оцтової кислоти. Цей фіксатор готують безпосередньо перед вживанням. Час фіксації від 1 до 24 години (іноді кілька діб). Фіксований матеріал зберігають у 70% спирті.

Фіксатори, що містять сулему (хлорид ртуті (II) HgCl 2 ). Сулема використовується у вигляді насиченого водного розчину в суміші з крижаною оцтовою кислотою (25:1), формаліном (8,5:1) та складніших композицій (фіксатор «Суза», фіксатор Ценкера та ін.). Час фіксації від 1 до 24 годин. Потім сулему видаляють спиртовим розчином йоду (6 частин 70%-ного спирту:1 частина йодної настойки), а йод видаляють 70%-ним спиртом. Фіксований матеріал зберігають у 70% спирті.

Фіксатори, що містять осмій (чотирьох осмій, або осмієва кислота). Дають найкращі результати, що використовуються при виготовленні препаратів як для світлової, так і електронної мікроскопії. Можна використовувати 1-2%-ний розчин осмієвої кислоти, але частіше застосовують композиції, наприклад, фіксатор Флемінгу 15 частин 2% осмієвої кислоти: 1 частина крижаної оцтової кислоти. Фіксація протікає повільно (від 24 години до кількох діб).

Крім перелічених фіксаторів загального призначення, існують спеціальні фіксатори. Наприклад, фіксатор для мітохондрій містить 4 частини 3%-ного розчину дихромату калію і 1 частина 40%-ного формаліну. Фіксатор для хлоропластів містить 15 частин насиченого розчину мідного купоросу, 1 частину 40%-ного формаліну та 5 частин води.

У ряді випадків замість хімічної фіксації застосовується швидке заморожування зразків, наприклад, при температурі рідкого азоту (196 0 ) або при температурі сухого льоду (78 0 ). Заморожені об'єкти можуть бути зневоднені шляхом сублімації води у вакуумі при температурі нижче 40 0 (цей процес називається ліофілізація).

Фарбування дозволяє виявляти внутрішньоклітинні структури, що мають підвищену спорідненість до певних барвників. Барвники - це низькомолекулярні органічні речовини, що мають підвищену спорідненість до певних хімічних компонентів клітини.

Існує безліч барвників, які використовуються для різних цілей. Потрібно мати на увазі, що вибір барвника пов'язаний з характером фіксації та різними методами попередньої обробки клітин.

Назви барвників можуть відповідати забарвленню (рубін, кармін, метиловий синій, метиленовий синій, генціановий фіолетовий, метиловий зелений, помаранчевий золотий). Іноді російські назви квітів замінюють німецькими, наприклад: метилблау, генціанвіолет. В інших випадках назви носять абстрактний, історично сформований характер, наприклад: піронін, фуксин, сафранін, флороглюцин, судан III. Іноді назва барвника не відповідає отриманому забарвленню, наприклад, синій тіонін дає фіолетово-червоне забарвлення. Досить рідко застосовуються хімічні номенклатурні назви барвників, наприклад: диметиламінобензальдегід, 8-аміно-1-нафтол-5-сульфокислота.

Розрізняють основні (лужні), кислотні та нейтральні барвники. Основні барвники вибірково фарбують базофільні клітинні структури (тобто структури із кислотними властивостями). Кислотні барвники вибірково фарбують ацидофільні або оксифільні клітинні структури (тобто структури з лужними властивостями). Нейтральні барвники фарбують і базофільні та ацидофільні структури.

Найменш токсичні барвники застосовуються для прижиттєвого забарвлення клітин. Ці барвники зазвичай застосовують у вигляді водних розчинів, наприклад: метиленовий синій (концентрація від 1:1000 до 1:10000), трипановий синій (0,5% розчин), нейтральний червоний (від 1:50000 до 1:200000).

Барвники для фіксованих клітин можуть використовуватись у чистому вигляді (водні або спиртові розчини, концентрація від 0,1 до 1%), наприклад: еозин, фуксин. Часто використовують суміші барвників, наприклад, суміш Романовського Гімза (містить метилен Азур, метиленовий фіолетовий, метиленовий синій та еозин), забарвлення по Маллорі (послідовне використання кислотного фуксину S, а потім суміші анілінового синього та помаранчевого золотого G), Азур , метилблау еозин.

Проте найчастіше барвник утворюється під час його приготування. Наприклад, широко відома речовина рослинного походження гематоксилін стає барвником лише після його окислення до гематеїну. Для фарбування ядер та хромосом широко використовуються барвники у поєднанні з органічними кислотами. Розглянемо методики приготування деяких найпростіших барвників.

Приготування 2% ацетофуксину. 1 грам основного фуксину розчиняють в 50 мл 40% оцтової кислоти при підігріванні на водяній бані.

Приготування 1% ацеторсеїну. До 1 г орсеїну додають 50 мл крижаної оцтової кислоти і наполягають близько 12 годин. Потім суміш нагрівають до кипіння та додають 50 мл дистильованої води. Потім нагрівають до кипіння та охолоджують, повторюючи цю процедуру 10 разів. За добу барвник фільтрують. Перед фарбуванням на 9 частин фарбника додають 1 частину 1 н. HCl.

Приготування 4% ацетокарміну. Розчин готують у термостійкій колбі з водяним холодильником. 4 грами ацетокарміну змішують з 100 мл 50% оцтової кислоти, і кип'ятять 1 годину. За добу барвник фільтрують. Аналогічним чином готується ацетолакмоїд.

Замість оцтової кислоти часто використовують інші органічні кислоти, наприклад, 40% молочну кислоту.

Всі барвники після приготування фільтрують і зберігають у прохолодному темному місці. Час фарбування препаратів залежить від температури (зазвичай від 20 хвилин до 1 доби). При нагріванні або кип'ятінні час фарбування скорочується.

Крім фарбування органічними фарбниками окремі структури можна виділити, використовуючи їх імпрегнацію сріблом та іншими металами.

Таким чином, при приготуванні деяких тимчасових мікропрепаратів необхідна фіксація та фарбування досліджуваного матеріалу. Завдяки цьому можна краще розглянути об'єкт під мікроскопом. Саме про методи приготування мікропрепаратів ми розповімо в четвертому параграфі.

§ 4. Способи приготування мікропрепаратів

При виготовленні тимчасових мікропрепаратів необхідно дотримуватись наступної послідовності операцій:

1. Вимити і ретельно витерти предметне та покривне скло. Щоб не зламати дуже тендітне покривне скло, треба помістити його в складку серветки між великим і вказівним пальцями правої руки і обережно витерти круговими рухами пальців.

2. Нанести на предметне скло піпеткою краплю рідини (води, гліцерину, розчину, реактиву або барвника).

3. Зробити зріз органу, що вивчається, за допомогою леза. Лезо має бути дуже гострим.

4. Вибрати найтонший зріз, перенести його за допомогою препарувальної голки або тонкого пензлика в центр предметного скла в краплю рідини.

5. Закрити зріз покривним склом так, щоб під нього не потрапило повітря. Для цього покривне скло взяти двома пальцями за межі та підвести під кутом нижню грань до краю краплі рідини та плавно його опустити.

6. Якщо рідини багато, і вона витікає з під покривного скла, видалити її за допомогою фільтрувального паперу. Якщо ж під покривним склом залишилися місця, заповнені повітрям, то додати рідину, помістивши її краплю поруч із краєм покривного скла, а з протилежного боку фільтрувальний папір.

Перед учителями біології та керівниками гуртків рано чи пізно постає завдання виготовити навчальний мікропрепарат. Яка ж речовина, здатна надовго зафіксувати біологічний об'єкт, і як зробити цю процедуру простою та доступною. Відомі бальзами (смоли-фіксатори) ніколи не належали до легкодоступних речовин, особливо на відстані від великих міст. Крім того, кажуть, що ці речовини не нешкідливі. І, нарешті, сам процес їхнього використання досить непростий.

Для виготовлення препарату можна використати клей ПВА. Важливо, щоб препарат був вологий, добре змочений, а клей свіжий і трохи розбавлений чистою холодною кип'яченою водою до потрібної концентрації (клей є емульсією і легко розлучається). Після кількох спроб і помилок необхідну концентрацію вдасться складати і визначати легко.

Потім, на чисте предметне скло наносять краплю води кип'яченою або дистильованою. Воду треба акуратно видалити чистою тканиною, що не залишає волосків, або фільтрувальним папером так, щоб скло було трохи вологим. Це, як і вологість зразка, сприяє рівномірному (без бульбашок) змочування. На підготовлену поверхню потрібно нанести невелику краплю заздалегідь приготовленого ПВА клею так, щоб не з'явилися бульбашки повітря. Вони іноді не заважають, але зовнішній вигляд препарату псують. У цю краплю акуратно переносять заздалегідь підготовлений зріз або зразок, наприклад, заздалегідь умертвлену гарячою водою дафнію. Потім плавним похилим рухом треба зверху покласти покривне скло, також чисте та злегка вологе. Шар клею між склом повинен бути якомога тоншим.

Якщо щось не вдалося, а зразок цінний і досить великий, майже завжди, на відміну від смол, можна його відмити простою водою і процедуру повторити. Надлишки клею акуратно змиваються тонким струмком води; потрібно стежити, щоб вона не затікала між склом. Покривне скло потрібно дотримувати. Трохи мутні залишки води можна акуратно видалити фільтрувальним папером або смужкою тонкої тканини без ворсу.

Готові препарати треба розкласти у сухому теплому місці. Індикатором готовності препарату є його прозорість. Залежно від багатьох чинників висихання до прозорого стану триває від однієї до чотирьох тижнів. Буває, що занадто товстий шар клею або клей, забруднений домішками, повністю прозорим не стає, це дещо погіршує зображення, але завдяки невеликій глибині різкості мікроскопа навіть такі препарати доступні для вивчення.

Немає гарантії, що цей метод можна застосовувати для виготовлення будь-яких препаратів, оскільки деякі вимагають фарбування, а барвники можуть взаємодіяти з клеєм.

Т.М. Лашкіна, вчитель біології та екології середньої школи № 23, із м. Сизрань пропонує наступний спосіб приготування мікропрепаратів. Можна взяти звичайний желатин, залити його водою для набухання. Потім у столову ложку набрати трохи набряклого желатину (без води) і нагріти над вогнем. Коли желатин розійдеться (не треба, щоб він закипав), капнути на предметне скло. У цю краплю покласти зразок і закрити покривним склом, добре притиснути його пальцем для рівномірного розподілу желатину. Мікропрепарат готовий.

Замість покривного скла можна використовувати целофан, якщо немає покривного скла. З іншого боку, целофан має одне перевагу: мікропрепарат не можна роздавити, т.к. целофан еластичний і не тріскається, як покривне скло.

З желатином треба працювати швидко, інакше він застигає. Але якщо таке трапиться, то достатньо потримати скло над вогнем і желатин знову стане рідким. Желатин нешкідливий, доступний і дуже економічний.

Приготування зрізів рослин

Для виготовлення зрізів об'єкт беруть великим та вказівним пальцями лівої руки та за допомогою скальпеля чи ножа вирівнюють його поверхню. У праву руку беруть лезо або бритву і роблять їм плавний швидкий рух об'єктом до себе та вправо (див. додаток рис. 1, А). Зрізи повинні бути невеликі та тонкі. Їх знімають з леза м'яким пензликом і переносять на предметне скло в краплю середовища (див. додаток рис. 1, Б).

Для виготовлення зрізів дрібних об'єктів останні поміщають у серцевину бузини (див. додаток рис. 2), попередньо зробивши у ній розріз чи поглиблення, і роблять вищеописану операцію. Лезо, що використовується для отримання зрізів має бути гострим (має легко перерізати волосся).

Мікропрепарати з ботаніки

Препарат зрізу епідерми з нижньої сторони віргінської традесканції в краплі води.

Для виготовлення препарату лист традесканції обгорнути навколо вказівного пальця лівої руки так, щоб нижня сторона фіолетового кольору була звернена назовні. Правою рукою за допомогою препарувальної голки надірвати епідерму над середньою жилкою в середній частині листа і зняти пінцетом її шматочок. При цьому мимоволі захоплюється частина м'якоті листа (мезофілу), але зазвичай можна знайти тонку ділянку на периферії, що складається з одного ряду клітин епідерми. Зірваний шматочок покласти на предметне скло в краплю води зовнішньою стороною нагору і накрити покривним склом.

Препарат клітин листа елодеї канадської.

У верхній частині втечі елодеї за допомогою пінцета відірвіть лист і перенесіть у краплю води на скло. Лист слід покласти нижньою стороною до предметного скла.

Препарат хромопластів у клітинах зрілих плодів.

За допомогою препарувальної голки візьміть маленькі шматочки м'якоті зрілих плодів конвалії, горобини та шипшини. Помістіть кожен шматочок у краплю води на предметне скло та обережно розділіть клітини. Накрийте покривним склом.

Препарат крохмальних зерен картоплі.

Розріжте бульбу картоплі. Зі свіжозрізаної поверхні візьміть скальпелем невелику кількість рідини, що виступила, і перенесіть в краплю води на предметне скло, накрийте покривним склом.

Препарат кам'янистих клітин оплодня груші.

На зрізі свіжого або фіксованого спиртом навколоплідника груші знайдіть групу кам'янистих клітин, витягніть їх. Помістіть на предметне скло та роздавіть кінчиком скальпеля.

Нанесіть на кам'янисті клітини краплю 1% розчину флороглюцину в 50% етанолі, потім додайте кілька крапель концентрованої соляної кислоти (при роботі з концентрованою кислотою слід дотримуватися правил техніки безпеки).

Деревні оболонки набудуть вишнево-червоний або малиновий колір.

Після появи фарбування видаліть реактив фільтрувальним папером, додайте краплю гліцерину та накрийте препарат покривним склом.

Препарат продихів клітин рослини.

Готують кілька зрізів нижньої епідерми листа і поміщають їх на 2 години в 5% розчин гліцерину. Зрізи поміщають на предметне скло у тому розчині. Розглядають препарат.

Потім гліцерин замінюють на воду, відтягуючи його з-під скла фільтрувальним папером. Дивляться, що змінилося.

Після цього воду замінюють 20%-ним розчином гліцерину або 1М розчином сахарози. Спостерігають зміни (див. додаток рис. 3).

Приготування мікропрепаратів із зоології

Приготування препарату найпростіших організмів сінного настою.

За допомогою скляної палички помістіть на предметне скло краплю розчину метилцелюлози.

Піпеткою капніть у цей розчин сінний настій. Накрийте краплю покривним склом. Розгляньте під мікроскопом[ 6 ] .

Приготування мікропрепаратів з фізіології людини

Препарат мазка крові для дослідження лейкоцитарної формулиКраплю крові наносять на сухе предметне скло (див. рис. 4, а). Шліфувальне скло встановлюють під кутом 45 ° до предметного. Кров при зіткненні зі шліфувальним склом розтікається по краю (див. додаток рис. 4, б). Після цього швидким рухом шліфувальне скло просувають вперед, ковзаючи поверхнею предметного скла. При цьому кров тонким рівномірним шаром розмазується предметним склом (див. додаток рис. 4, в).

Добре приготовлений мазок крові виглядає на просвіт жовтуватим, рівномірним та прозорим. У цьому випадку формені елементи крові розташовуються в ньому в один шар.

Приготування мікропрепаратів з мікробіологів

Приготування препаратів мертвих клітин мікроорганізмів.

Для детального вивчення мікроорганізмів застосовують фіксовані мікропрепарати. При фіксації бактерій вбивають і потім фарбують.

Приготування фіксованих препаратів складається з наступних операцій: приготування мазка, висушування препарату, його фіксація, фарбування та просушування.

1 етап: Техніка приготування мазків (див. додаток рис. 5).

1. Приготування мазка з щільного живильного середовища

• на знежирене предметне скло наносять петлею невелику краплю фізіологічного розчину;
• в праву руку беруть бактеріологічну петлю, в ліву пробірку з культурою;
• петлю стерилізують, вносячи її в полум'я пальника у вертикальному положенні (накалювання до червоного) (див. додаток рис. 5-1);
• виймають пробку з пробірки, захопивши її мізинцем правої руки, і обпікають на спиртовці край пробірки (див. додаток рис. 5-2,3);
• петлю вносять у пробірку, охолоджують її, торкаючись стінок, після чого з поверхні середовища знімають невелику кількість культури (див. додаток рис. 5-4);
• петлю виймають, не торкаючись стінок пробірки, обпалюють краї пробірки над спиртовкою і закривають пробкою (див. додаток рис. 5-5,6);
• захоплену мікробну культуру вносять у краплю фізіологічного розчину, ретельно розмішують та рівномірно розподіляють по склу у вигляді овалу, кола або квадрата площею 1-1,5см. 2 (Див. додаток рис. 5-7);
• після закінчення приготування мазка петлю знову стерилізують (див. додаток рис. 5-8).

1. При виготовленні мазка з культур з рідких живильних середовищ на предметне скло наносять 1-3 петлі матеріалу, що досліджується, і рівномірно розподіляють по ньому; при цьому використання фізіологічного розчину не потрібне. Далі надходять як описано вище.

2 етап: Висушування мазків.

Приготовлений мазок висушують на повітрі, над полум'ям пальника (але не в полум'ї), в потоці теплого повітря або термостаті.

Необхідно знати, що нагрівання може порушити структуру мікробів, а також те, що не до кінця висушений препарат при фіксації виявиться зіпсованим.

3 етап: Фіксація мазків.

Розрізняють фізичний та хімічний методи. При фіксації фізичним способом скло з мазком, зверненим догори, повільно проводять 3-4 рази через полум'я. У цьому мікроорганізми гинуть, мазок прикріплюється до скла і змивається. З недофіксованого мазка мікроби змиваються, у перефіксованому спостерігається деструкція мікроорганізмів, тобто розпад на окремі фрагменти.

Фіксація хімічним методом досягається зануренням мазків у фіксуючу рідину, якій може бути:

Спирт (15-20 хв)

Спирт-ефір (10-15 хв)

Метиловий спирт (5 хв)

Хлороформ (кілька секунд)

Охолоджений ацетон (5 хв)

4 етап: Забарвлення мазків.

Забарвлення мікроорганізмів має велике діагностичне значення. Вона являє собою складний фізико-хімічний процес, в механізмі якого істотну роль відіграють явища адсорбції, капілярності, хімічної спорідненості між барвниками і об'єктом, що фарбується, рН середовища, в якому вони знаходяться.

Розрізняють прості (орієнтовні) та складні (диференціальні) методи фарбування мікроорганізмів.

Просте фарбування.

Просте забарвлення бактерій виявляє лише їхню морфологію (форму, розмір і взаємне розташування мікробів). Зазвичай використовується лише один барвник (метиленовий синій або генціановий фіолетовий). Виділяють позитивний та негативний методи фарбування.

Позитивний:

• Приготовлений і фіксований мазок поміщають у спеціальний місток над ванною.
• Наносять будь-який барвник на певний час (кількість фарби має бути такою, щоб покрити всю поверхню мазка, достатньо кількох крапель). При цьому необхідно стежити, щоб барвник на мазку не підсихав, у разі потреби на мазок наливають нові порції барвника.
• Потім ретельно та швидко промивають водою.
• Висушують фільтрувальним папером.
• Наносять краплю імерсійної олії та мікроскопують.

Мазок вважається якісним, якщо бактерії розташовані ізольовано один від одного та рівномірно забарвлені.

Негативний:

У цьому методі забарвлюється фон мазка, а мікроорганізми залишаються незабарвленими. Він застосовується для дослідження мікроорганізмів, оболонки яких погано сприймають анілінові барвники (лептоспіри, спірохети).

• На край предметного скла наносять краплю туші та змішують її петлею з краплею культури.
• Мазок роблять ребром шліфованого предметного скла аналогічно до приготування мазка крові (див. додаток рис. 6). Предметне скло кладуть на горизонтальну поверхню та притримують лівою рукою; правою рукою до краплі присувають під кутом 45 0 шліфувальне скло, по краю якого рівномірно розтікається крапля; відразу ж, щільно притискаючи шліфувальне скло в тому ж положенні під кутом, просувають його ліворуч по предметному склу, отримуючи рівномірний мазок.
• Дають висохнути та мікроскопують.

Диференційне (складне) забарвлення.

Складні або диференціальні способи фарбування бактерій засновані на особливостях фізико-хімічної будови мікробної клітини. Дозволяють, застосовуючи кілька розчинів барвників та реактивів, визначити морфологічні властивості та структурні компоненти клітини (спори, капсули, джгутики та ін.).

Одним із найважливіших методів є фарбування мікробів за Грамом. Це універсальний диференціально-діагностичний метод забарвлення, запропонований датським ученим Грамом 1884г. Він використовується як один із ключів у визначниках мікробів.

Фарбування мікробів за Грамом.

Грамприналежність мікробів залежить від хімічного складу бактеріальної клітини та будови клітинної стінки.

• На фіксований мазок кладуть невеликий шматочок фільтрувального паперу і наливають розчин генціанвіолету на 1-2 хвилини.
• Знімають папір, зливають фарбу і, не промиваючи водою, наливають на препарат розчин Люголя на 1 хвилину (мазок чорніє).
• Обробка мазка спиртом протягом 30 секунд (занурюють у склянку 2-3 рази).
• Промивають водою.
• Додатково фарбують розведеним фуксином протягом 1-2 хвилин.
• Зливають фарбу, промивають водою, обсушують фільтрувальним папером, досліджують із імерсійною системою.

Грампозитивні мікроорганізми забарвлюються фіолетовим кольором, не знебарвлюються спиртом і сприймають основний фуксин. Грамнегативні мікроорганізми знебарвлюються спиртом і набувають рожево-червоного кольору від фарбування фуксином.

Виявлення капсул методом негативного контрастування.

Невелика кількість клітин з твердого живильного середовища поміщають петлею на предметне скло в краплю розведеного фуксину, змішують з краплею туші, накривають покривним склом і розглядають під мікроскопом. На сірому фоні препарату добре видно безбарвні капсули, клітини мікроорганізмів, що оточують, пофарбовані в рожевий колір.

Забарвлення ендоспор.

• На фіксований мазок наливають метиленовий синій (за Леффлером).
• Барвник доводять до кипіння, тримаючи предметне скло пінцетом над полум'ям пальника. У міру випаровування барвника його додають. Тривалість фарбування триразова, по 10-15 секунд.
• Предметне скло охолоджують та ретельно промивають водою.
• Додатково протягом 30 секунд дофарбовують 0,5% водним розчином сафраніна (або фуксину Циля).
• Барвник зливають, промивають водою, сушать і розглядають під мікроскопом.

При правильному забарвленні вегетативні клітини мають червоний, а суперечки синій колір (світло-рожевий).

5 етап: Просушування.

Воду, що залишилася на склі після промивання, обережно видаляють фільтрувальним папером, або відсмоктуючи її краєм паперу, або злегка притискаючи шматочок паперу до мазка. Забарвлений мазок повинен бути абсолютно сухим, оскільки залишок води утворює з кедровим маслом, нанесеним на мазок, каламутну емульсію, що заважає мікроскопуванню.

Приготування препаратів живих клітин мікроорганізмів.

Метод вивчення мікробів у живому незабарвленому стані має такі переваги:

• Мікроби вивчаються у непошкодженому вигляді.
• Спостереження мікробів у живому вигляді дозволяє виявити ряд властивостей, які не виявляються у вбитих мікробів (активна рухливість).

Водночас метод має й низку недоліків:

• Проблема дослідження незабарвлених бактерій через їх мінімальної величини.
• Неможливість довго зосередить увагу мікробі, оскільки він швидко переміщається з поля зору.

У живому стані мікробів досліджують у “розчавленій краплі”, “висячій краплі” та “відбитком”, також розглядають “агарову плівку”; у деяких випадках при цьому застосовують прижиттєве (вітальне) забарвлення мікробів.

Препарат "розчавлена ​​крапля".

На предметне скло наносять краплю води, поміщають у неї невелику кількість клітин мікроорганізмів, що вивчаються, розмішують і накривають покривним склом. Мікроорганізми, вирощені і на плоскому і рідкому поживному середовищі, переносять у краплю води бактеріологічною петлею; вирощені в рідкому середовищі можна переносити так само стерильною піпеткою. При тривалому вивченні об'єкта, що мікроскопується, краю покривного скла рекомендується залити лаком для нігтів, що запобіжить швидке висихання препарату (див. додаток рис. 7).

Препарат "висяча крапля".

Крапля суспензії мікроорганізмів петлею або звичайним пером наносять на покривне скло, яке повертають краплею вниз і поміщають на спеціальне предметне скло з поглибленням (лункою) в центрі. Крапля повинна вільно висіти, не торкаючись країв та дна лунки. Краї лунки попередньо змащують вазеліном. Крапля виявляється герметизованою у вологій камері, що уможливлює багатоденне спостереження за об'єктом. Для тривалих спостережень використовують стерильні скла, а суспензію мікроорганізмів готують у рідкому живильному середовищі. Працюючи з бактеріями використовується рідко (див. додаток рис. 8).

Препарат "відбиток".

З агаризованого середовища, на якому мікроорганізми ростуть суцільним газоном або у вигляді окремих колоній, вирізують скальпелем невеликий кубик і переносять його на предметне скло так, щоб поверхня з мікроорганізмами була звернена вгору. Потім до газону або колонії прикладають чисте покривне скло, злегка натискають на нього петлею або пінцетом і відразу ж знімають, намагаючись не зрушити вбік. Отриманий препарат поміщають відбитком донизу краплю води або метиленового синього (1:40) на предметне скло. Відбиток можна отримати на предметному склі, якщо торкатися поверхні колонії або газону предметним склом. Використовують в основному для дослідження спороношення стрептоміцетів.

Препарат "агарова плівка" (або "мікрокультура").

На тонке простерилізоване та нагріте предметне скло наносять стерильною нагрітою піпеткою 0,2-0,3 мл гарячого агаризованого живильного середовища і розподіляють по всій поверхні скла. Після застигання середовища видаляють петлею зайвий агар, залишаючи дві тонкі ділянки плівки, величиною з покривне скло кожен. У центр квадратів бактеріальною петлею чи піпеткою наносять краплю рідкої культури чи суспензії клітин мікроорганізму. Скло поміщають у вологу камеру (чашка Петрі із шаром мокрого фільтрувального паперу), яку ставлять у термостат. Перед мікрокопіюванням на плівку з мікрокультурою, що виросла, наносять краплю барвника або краплю води в разі підсихання плівки і потім обережно накривають покривним склом.

Прижиттєве фарбування мікробів.

При роботі з роздавленою краплею для кращої видимості бактерій рідину можна трохи підфарбувати, вводячи під покривне скло маленьку краплю барвника. При цьому бактерії забарвляться і будуть виразнішими в полі зору мікроскопа.

1 спосіб фарбування:

• На чисте предметне скло наносять насичений водний розчин метиленової сині.
• Дають висохнути.
• Фільтрувальним папером протирають скло, поки наліт не набуде світло-блакитного відтінку.
• На предметне скло наносять краплю досліджуваного матеріалу та накривають покривним склом.
• Мікроби поступово забарвлюються у блакитний колір, залишаючись живими.

2 спосіб фарбування:

Крапля досліджуваного матеріалу змішують на предметному склі з фарбою (0,1-0,01%), накривають покривним склом і розглядають під мікроскопом.

Таким чином ми вивчили, які існують способи приготування як тимчасових, так і постійних мікропрепаратів, з яких організмів їх можна приготувати. З'ясували, що мікропрепарати широко використовують у всіх біологічних науках.

ВИСНОВОК

Вивчення наукової та методичної літератури дозволило нам зробити висновки про те, що мікропрепарати широко використовуються під час уроків біології і для цього необхідно вміти їх виготовляти.

Мікропрепарати ділять на тимчасові та постійні. Тимчасові препарати не зберігаються, їх готують у ході лабораторної роботи безпосередньо перед вивченням об'єкта. Постійні препарати можуть зберігатися багато років. В основному їх виготовляють промисловим шляхом, але їх можна приготувати і самостійно.

До мікропрепаратів пред'являють певні вимоги щодо виготовлення, зберігання та використання, яких необхідно дотримуватись.

Перед заняттям вчитель повинен проінструктувати учнів, як правильно поводитися з мікропрепаратами.

Для приготування мікропрепаратів з біології необхідні спеціальне обладнання та інструменти: предметне скло, покривне скло, піпетки, чашки Петрі, різні колби, препарувальні голки, пінцети, скальпелі, спиртування та ін. мікропрепаратам пред'являються вимоги щодо зберігання та підготовки, яких теж потрібно дотримуватися.

Іноді, матеріал для мікропрепаратів потрібно зафіксувати та пофарбувати, для чого використовуються спеціальні барвники та фіксатори.

Мікропрепарати можна приготувати різними способами. Це і приготування зрізів, мазків, відбитків, і приготування мікропрепаратів живих клітин організмів (висяча крапля, роздавлена ​​крапля, відбиток, агарова плівка) - все це тимчасові мікропрепарати. Матеріалом їм можуть бути різні частини рослин, тканини, мікроорганізми.

БІБЛІОГРАФІЧНИЙ СПИСОК

1. Бавтуто Г.А. Практикум з анатомії та морфології рослин [Текст]/Г.А. Бавтуто, Л.М. Єрей. М.: Нове видання, 2002. 464с. : іл.
2. Мікробіологія [Текст]: методичні рекомендації до проведення лабораторних занять для студентів-біологів/уклад. Н. В. Шарипова.- испр., допов.- Шадрінськ, 2009. - 47 с., іл.
3. Практикум з анатомії та морфології рослин [Текст]: навч. посібник для студ. вищ. навч. закладів/В.П. Вікторов, М.А. Гуленкова, Л.М. Дорохіна та ін; За ред. Л.М. Дорохіною. - М.: Академія, 2001. 176 с.
4. Практикум з мікробіології [Текст]: навч. посібник для студ. вищ. навч. закладів/А.І. Нетрусов, М.А. Єгорова, Л.М. Захарчук та ін; За ред. А.І. Нетрусова. М.: Академія, 2005. 608 с.
5. Практикум з фізіології рослин [Текст]: навч. посібник для студ. вищ. пед. навч. закладів/І.В. Плотнікова, Є.А. Живухіна, О.Б. Михалєвська та ін; За ред. В.Б. Іванова. М.: Академія, 2001. 144 с.
6. Суханова Л.В. Зошит для лабораторних робіт (7-8 клас) [Текст]/Л.В. Суханова // 1 вересня: вид. будинок 1 вересня. 2004. № 25-26. З. 36-46.
7. Барінов О.Г. [Електронний ресурс]. Режим доступу:http://bio.1september.ru/articlef.php?ID=200104304. - Назва з екрана.
8. Вікіпедія [електронний ресурс]. - Режим доступу:http://ua.wikipedia.org/wiki/Мікропрепарат- Назва з екрана.
9. Методичні поради [електронний ресурс]. - Режим доступу:http://freecode.pspo.perm.ru/080/work/МЕТОДИЧНІ РЕКОМЕНД АЦІЇ. htm- Назва з екрана.
10. http://labx.narod.ru/documents/micropreparaty.html- Назва з екрана.
11. Мікроскопічна техніка у біології [електронний ресурс]. - Режим доступу:http://labx.narod.ru/documents/microscope_slides.html- Назва з екрана.
12. Мікроскопічна техніка у біології [електронний ресурс]. - Режим доступу:http://labx.narod.ru/documents/prigotovlenie_micropreparatov.html- Назва з екрана.
13. Сайт учителя біології [електронний ресурс]. - Режим доступу:http://tana.ucoz.ru/load/436-1-0-354- Назва з екрана.
14. Куточок Росії. Природа Кузбасу [електронний ресурс]. - Режим доступу:http://prirodakem.narod.ru/Biblioteka/My_st/doci/kl_ob.htm- Назва з екрана.
15. Фірма “Новий ліцей” [електронний ресурс]. - Режим доступу:http://novylicey.narod.ru/microprep_3_5.htm - назва з екрана.
16. Електронна бібліотека ДАГУ(Гірничо-Алтайський державний університет) [електронний ресурс]. - Режим доступу:http://elib.gasu.ru/eposobia/papina/malprak1/R_1_2.html- Назва з екрана.

додаток

Мал. 1. Положення рук при виготовленні зрізу (А) та зняття зрізів з бритви (Б)

Мал. 2. Закладка об'єкта в серцевину бузини.

Мал. 3. Приготування мікропрепарату.

Покриття об'єкта покривним склом.

Мал. 4. Схема приготування мазка крові

Мал. 5. Приготування препарату-мазка

Мал. 6. Приготування мазка.

Мал. 7. “Роздавлена ​​крапля”: вид зверху та збоку

Мал. 8. “Висяча крапля”: вид зверху та збоку

Для вивчення мікроорганізмів виробляють мікроскопування як живих, так і вбитих мікробів у незабарвленому та забарвленому вигляді. Мікроскопічний препарат готують на предметному склі – платівці з тонкого скла (76х26 мм) з добре відшліфованими краями. Предметне скло, що вживається при мікробіологічному дослідженні, має бути кристально чисте і абсолютно знежирене. На поверхні знежиреного скла вода легко розпливається та не утворює крапель кулястої форми.

Нове скло перед вживанням кип'ятять в 1%-ному розчині соди 10 хв, промивають водою, слабкою соляною кислотою і добре прополіскують у дистильованій воді. Скло, що були у вживанні, необхідно обробити розчином сірчаної кислоти протягом 2 годин, добре промити у воді і прокип'ятити 10 хв в 4% розчині соди. Сполощені потім дистильованою водою скло протирають чистою полотняною ганчірочкою.

У лабораторії завжди слід мати запас готового для роботи скла. Зберігати предметне скло найкраще в банку з притертою пробкою, зануреними в суміш спирту з ефіром, взятих у рівних обсягах. З банки предметні шибки дістають пінцетом. Покривне скло - вирізані квадратом або прямокутником тонкі скельця (товщиною 0,15-0,17 мм) розмірами 18х18 мм, 20х20 мм, 18х24 мм.

Дослідження мікроорганізмів у живому вигляді

Мікроорганізми можна мікроскопувати як у живому, так і в мертвому (фіксованому) стані на спеціально підготовлених препаратах. Плісневі гриби та дріжджі краще розглядати в живому вигляді в препараті «розчавлена» крапля. Клітини цих мікроорганізмів відносно великі, і зазвичай при мікроскопуванні в живому вигляді добре виявляються їх форма, розміри, деякі деталі внутрішньої будови, а також характер розмноження (брунькування, поділ, спороутворення тощо).

Бактерії зважаючи на їх малі розміри частіше розглядають у мертвому вигляді на фіксованих пофарбованих препаратах. При цьому виходить ясніше уявлення про форму та розміри клітин, про здатність їх до спороутворення. У живому вигляді у «роздавленій» краплі бактерії розглядають у тому випадку, коли з'ясовують їхню здатність до руху.

Препарат "розчавлена" крапля. На знежирене предметне скло прожареною петлею наносять краплю стерильної води, в яку тією ж петлею вносять невелику кількість досліджуваної культури мікроорганізму (дріжджів або бактерій), взятої з живильного середовища. З рідкого середовища культуру беруть разом із краплею рідини, а за потреби додають краплю стерильної води. Суспензія культури мікробів на склі повинна давати лише слабку каламутню. При мікроскопуванні дріжджів у краплю рідини на склі додають петлею невелику кількість метиленової сині (до блакитного фарбування) і всю цю суміш ретельно розмішують. Прижиттєве забарвлення дріжджів метиленовою синьою застосовується для того, щоб виявити мертві клітини, що легко забарвлюються в синій колір. Живі клітини залишаються незабарвленими, оскільки пропускають фарбу через свою оболонку.

Приготовлений на предметному склі препарат дріжджів накривають покривним склом та розглядають з об'єктивом 40Х. У такому препараті зазвичай добре видно прозорі овальні або круглі клітини дріжджів з ядрами та оболонками, які добре помітні у клітинах живих дріжджів. Мертві клітини, як правило, дрібніші в порівнянні з живими м пофарбовані в синій колір.

Препарат живих бактерій готується подібно до препарату дріжджів, але бактерії можна розглядати і без додавання фарби. На поверхню покривного скла наноситься крапля імерсійної олії, і препарат розглядається з імерсійним об'єктивом 90 X, найкраще в затемненому полі (тобто з прикритою діафрагмою). Якщо культура бактерій рухлива, то добре видно швидкі різнохарактерні рухи окремих клітин.

Для приготування препарату цвілевих грибів дуже обережно (щоб не зруйнувати органів спороношення) спеціальною голкою (можна препарувальною) або ботанічним пінцетом знімають шматочок плівки гриба і переносять його в краплю води, попередньо нанесену на предметне скло. Препарат обережно, трохи притискаючи, накривають покривним склом і розглядають під мікроскопом з об'єктивом 8Х. При цьому збільшенні добре відрізняється будова органів спороношення цвілевих грибів. Для детального вивчення окремих деталей будови (гіф, сумок тощо) препарат розглядають з об'єктивом 40X. При цьому обов'язково слід регулювати освітлення за допомогою діафрагми для отримання більш чіткого зображення деталей, що розглядаються.

При приготуванні препаратів у роздавленій краплі слід пам'ятати таке:

1. При опусканні покривного скла на краплю слід торкнутися його рубом до краю краплі і поступово нахиляючи опустити скло.

2. Крапля не повинна бути великою, щоб рідина не переливалася за краї та не потрапляла на верхню сторону покривного скла. Надлишок води знімають шматочком фільтрувального паперу.

3. Поодинокі бульбашки повітря, що залишилися під покривним склом, зазвичай не заважають спостереженню. Але якщо бульбашок багато, препарат слід приготувати заново.

4. Препарат не повинен бути надто густим, щоб мікроорганізми не затуляли один одного.

5. Приготовлені препарати розглядають негайно (особливо живих бактерій), тому що в іншому випадку вода висихає і клітини бактерій втрачають рухливість.

6. Бактеріологічну петлю (або голку) перед кожним черговим пасажем і після нього (нанесення краплі води на скло, зняття культури з агару та її розмішування, взяття фарби тощо) слід обов'язково до червоного прожарювати в полум'ї пальника.

Після прожарювання петлю швидко охолоджують на повітрі (тримають 2-3 сек, ні до чого не торкаючись) і приступають до виконання чергового етапу роботи.

Дослідження мікроорганізмів у фіксованому та забарвленому вигляді

Приготування мазка.На чисте знежирене предметне скло платинової петлею наносять матеріал (рис. 62). Якщо він рідкий, то краплю, взяту петлею, рівномірно розподіляють по поверхні предметного скла тонким шаром на площі приблизно в 1 см2. Якщо ж вивчається агарова культура, то предметне скло попередньо наносять краплю стерильної води, у якій тонким шаром розподіляється досліджувана культура. Виходить так званий мазок. Усі маніпуляції з приготування мазка необхідно виконувати з дотриманням правил асептики (над полум'ям пальника стерилізують петлі, кінці судин з матеріалом, що досліджується, ватяні пробки тощо). Зробивши мазок, його сушать за кімнатної температури, помістивши на спеціальний сушильний столик (рис. 63). Хороший мазок після сушіння повинен давати ледь помітний наліт. Препарат із густим мазком для спостереження малопридатний.

Для прискорення висихання можна обережно підсушити мазок над полум'ям пальника. Предметне скло у разі над полум'ям пальника тримають те щоб мазок був звернений вгору.

Фіксація мазка.Предметне скло з висушеним мазком, зверненим вгору від полум'я пальника, проводять 3-4 рази на межі між світлою та темною частиною полум'я. Мета фіксації – вбити мікробні клітини, прикріпити їх до скла та полегшити фарбування. Мертві клітини краще сприймають фарбу, ніж живі. Препарат не повинен перебувати в полум'ї більше 2 сек. Зайвого нагрівання мазків потрібно уникати, тому що при цьому сильно змінюється структура клітин, мазок погано фарбуватиметься. При недостатній фіксації мазка його можна змити при подальшому забарвленні. Практично достатність нагрівання визначають, прикладаючи предметне скло до руки. При цьому повинен відчуватись легкий опік.

Забарвлення мазків.У лабораторній практиці користуються простими та складними методами фарбування мікробів. Складні, чи диференціальні, способи фарбування, як зазначалося, застосовуються докладного вивчення структури клітин. При простому забарвленні препаратів на фіксований мазок наливають кілька крапель будь-якого барвника (метиленової сині, розведеного фуксину тощо). Для отримання більш чистих препаратів рекомендується розчин, що фарбує, наливати на відрізок фільтрувального паперу, яким покривають мазок. Розчин фарби загалом витримують на мазку 2-3 хв (залежно від виду фарби). Фуксин фарбує інтенсивно, причому фарбуються однаково добре всі види бактерій. Тривалість фарбування розчином фуксину цілком достатньо протягом 1-2 хв. Лужну метиленову синь залишають для фарбування мазка на 2-3 хв. Вона фарбує менш сильно, але препарат виходить більш витончений, до того ж різні бактерії набувають фарбування різної інтенсивності. При фарбуванні метиленової синю у великих клітин (наприклад, дріжджових) диференціюється ядро ​​та цитоплазма. Розчин генціанвіолету тримають для фарбування 3-5 хв.

Після закінчення зазначеного терміну фарбу зливають із предметного скла. Якщо на мазок поміщався фільтрувальний папір, його потрібно обережно зняти пінцетом і потім промити мазок легким струменем дистильованої води (можна водопровідної). Струмінь води слід направляти на ребро предметного скла, а не на мазок. Промитий препарат висушують на повітрі за кімнатної температури або за допомогою смужок фільтрувального паперу.

На сухий мазок наносять краплю кедрової олії. Не слід кедрова олія наносити на вологий (а тим більше на мокрий) мазок. При цьому виникає емульсія води в кедровому маслі та чіткість зображення в мікроскопі різко знижується.

Сутність складних методів фарбування полягає в тому, що препарат забарвлюють не однією, а двома та великою кількістю контрастних фарб. У мікробіологічній практиці складний метод фарбування мікробів за Грамом має дуже важливе значення при диференціації мікробів.

Техніка фарбування бактерій способом Грама полягає в наступному. На фіксований мазок кладуть смужку фільтрувального паперу і наливають карболовий розчин генціанвіолету на 1-2 хв. Потім фарбу зливають. Знявши папірець і не промиваючи препарат водою, наносять на мазок розчин Люголю також на 1-2 хв (мазок чорніє). Після закінчення зазначеного часу розчин Люголя зливають з предметного скла і занурюють скло в склянку зі спиртом для знебарвлення. Предметне скло трохи похитують у спирті, витримуючи 30-60 сек. Швидко промивають мазок водою і додатково фарбують розведеним фуксином протягом 1-2 хв. Фуксин зливають, препарат промивають водою, висушують та мікроскопують.

Виконати забарвлення бактерій за Грамом можна, користуючись модифікацією цього способу, запропонованої Синьовим. Замість розчину карболового генціанвіолету використовують фільтрувальний папір, просочений цим розчином і висушений. На фіксований мазок накладають смужку такого паперу, наносять кілька крапель стерильної води, так щоб папірець виявився змоченим, і фарбують препарат протягом 2 хв. Потім папірець знімають, на препарат наливають розчин Люголя і далі надходять так, як зазначено вище при фарбуванні за Грамом.

По відношенню до забарвлення за Грамом всі бактерії поділяють на дві групи: грампозитивні (грампозитивні) і грамнегативні (грамнегативні). Перші в результаті фарбування залишаються забарвленими у фіолетовий колір; другі - знебарвлюються спиртом і при додатковому фарбуванні фуксином набувають червоного кольору. Пояснюється це тим, що у грампозитивних бактерій у цитоплазмі клітин містяться специфічні білки та магнієва сіль рибонуклеїнової кислоти, які з генціанвіолетом та йодом утворюють комплекс фіолетового кольору, що не руйнується під дією спирту. У грамнегативних бактерій магнієва сіль рибонуклеїнової кислоти в клітинах відсутня, і такого комплексу при фарбуванні генціанвіолетом та йодом у цитоплазмі не утворюється. Генціанвіолет і йод надалі легко знебарвлюються спиртом.

Приготування розчинів, що фарбують

При бактеріологічному дослідженні для фарбування бактерій застосовуються основні анілінові фарби. Найчастіше використовуються: основний фуксин (червона фарба), метиленова синь (синя фарба), генціанвіолет, кристалвіолет, метилвіолет (фіолетові фарби). Ці фарби продаються у вигляді аморфних або кристалічних порошків, з яких готують розчини, що фарбують.

Вихідним матеріалом приготування необхідних робочих фарб є насичені спиртові розчини зазначених барвників. Спиртові розчини готують про запас і зберігають у склянках з притертими пробками. Самі собою спиртові розчини для фарбування мікробів не застосовуються.

Насичений спиртовий розчин барвника отримують розчиненням 1 г його в 10 мл 96% етилового спирту (етанолу). Фарба зазвичай не розчиняється, і на дні флакона залишається невеликий осад. Отриманий спиртовий розчин наполягають 3-5 днів, щодня збовтуючи.

Робочий водно-спиртовий розчин фарби одержують змішуючи 1 мл насиченого спиртового розчину з 10 мл дистильованої води. Для підвищення барвної здатності як протрава до водно-спиртових розчинів фарб додають карболову кислоту.

Рецепти приготування найбільш уживаних фарб.

Карболовий фуксин Ціля. 10 мл насиченого спиртового розчину основного фуксину змішують зі 100 мл 5%-ної карболової кислоти. Можна приготувати розчин, що фарбує, і безпосередньо з сухого барвника. Для цього 1 г основного фуксину розтирають у ступці з 5 г карболової кристалічної кислоти. Для найкращого розтирання рекомендується додати кілька крапель гліцерину. Потім потроху доливають 10 мл 96% спирту. До рівномірно розтертої маси поступово доливають 100 мл дистильованої води, перемішують і залишають на 1-2 доби. Потім відфільтровують через паперовий фільтр. Фуксин Циля стійкий і може зберігатися дуже довго. Його використовують для фарбування спор і кислотостійких мікробів, які важко сприймають фарбу.

Фуксин Пфейфера(Розведений фуксин). 1 мл карболового фуксину Цилю змішують з 9 мл дистильованої води. Розчин нестійкий, тому його готують безпосередньо перед фарбуванням препаратів. Використовують для простого фарбування мазків та додаткового фарбування їх за методом Грама.

Карболовий генціанвіолет. 10 мл насиченого спиртового розчину генціанвіолету змішують зі 100 мл 5%-ної карболової кислоти або 1 г генціанвіолету розтирають у ступці з 5 г кристалічної карболової кислоти, поступово додають 10 мл 96%-ного спирту і 100 мл дистильованої води.

Лужна метиленова синь(за Лефлером). До 100 мл дистильованої води додають 30 мл насиченого спиртового розчину фарби і 1 мл 1%-ного розчину їдкого калі (КОН). Розчин фільтрують. Фарба дуже міцна, причому барвник старої фарби вище, ніж свіжоприготовленої.

Водний розчин метиленової сині. 1 г метиленової сині розчиняють у 100 мл дистильованої води.

Розчин Люголю. 2 г йодистого калію розчиняють у 5 мл дистильованої води, додавши 1 г кристалічного йоду. Об'єм доводять водою до 300 мл. Розчин Люголя повинен мати слаболужну або нейтральну реакцію. При кислій реакції його нейтралізують (за лакмусом) двовуглекислою содою. Розчин слід зберігати у склянках із темного скла, оберігаючи від дії світла.

Приготування просоченого генціанвіолетом фільтрувального паперу для фарбування мікробів за Грамом у модифікації Синева. Розчин карболового генціанвіолету поміщають на добу в термостат при 37 °С, потім фільтрують паперовий фільтр. Фільтрат виливають у тарілку і занурюють у нього нарізану смужками фільтрувальний папір на 1-2 хв. Просочений фарбою папір підсушується, нарізається шматочками (2х4 см) і зберігається у темних склянках із притертою пробкою. Термін зберігання необмежений.

Примітка.Свіжоприготовані карболові розчини фарб мають на поверхні плівку з металевим блиском. Ці розчини стійкі та зберігаються досить довго. Однак при занадто тривалому зберіганні можуть стати непридатними; у цьому випадку металевий блиск на поверхні їх пропадає, а на дні утворюється дрібний порошкоподібний осад.

Державна бюджетна освітня установа

Вищої професійної освіти

«Башкирський державний медичний університет»

Міністерства охорони здоров'я та соціального розвитку

Російської Федерації

Кафедра фармакогнозії з курсом ботаніки та основ фітотерапії

«9» _ вересня _____2012 р.

Дисципліна БотанікаСпеціальність 060301 Фармація

Курс 1 (очне відділення)Семестр 1

Розділ: «Вчення про клітину. Ергастичні та секреторні речовини в рослинній клітині»

Лабораторна робота №1

На тему: Оптичні мікроскопи. Особливості ботанічної мікротехніки. Осмотичні властивості рослинної клітини»

Лабораторна робота №2

На тему: «Будова клітинна стінка. Пластиди, запасні та мінеральні включення»

студентів

Уфа 2012
Лабораторна робота №1

Тема заняття: «Оптичні мікроскопи. Особливості ботанічної мікротехніки. Осмотичні властивості рослинної клітини»

1. Актуальність.Вивчення прийомів ботанічної мікротехніки є необхідною умовою для засвоєння практичних навичок у розділі «Цитологія, гістологія та анатомія рослин». Вивчення будови рослинної клітини та її осмотичних властивостей дає уявлення про клітинну організацію рослинних організмів, особливості будови та відмінності від тварин.

2. Цілі заняття:

1. Набути навички роботи з мікроскопом;

2. Набути навички приготування тимчасових мікропрепаратів

3. Набути навички ботанічної мікротехніки для мікроскопічного аналізу цільної, різаної та порошкованої лікарської рослинної сировини;

4. Вивчити особливості будови рослинної клітини

5. Вивчити властивості рослинної клітини

знати :

· Влаштування мікроскопа та правила роботи з ним;

· Історію вивчення клітини, постулати клітинної теорії;

· будова прокаріотичної клітини;

· будова еукаріотичної клітини, її основних органоїдів;

· Особливості будови рослинної клітини.

Для формування професійних компетенцій студент має вміти :

· Приготувати мікропрепарат;

· Розглянути мікропрепарат при малому та великому збільшенні мікроскопа;

· Знайти органи клітини;

· Провести реакції плазмолізу та деплазмолізу, дати теоретичне обґрунтування;

Для формування професійної компетенції студент має володіти :

· Ботанічним понятійним апаратом;

· технікою мікроскопування та гістохімічного аналізу мікропрепаратів рослинних об'єктів.

3. Необхідні базисні знання та вміння:

· сучасні уявлення про будову прокаріотичної та еукаріотичної клітини, їх відмінності.

· Влаштування мікроскопа.

4. Тривалість позааудиторної роботи– 2 академічні години (90 хв).

Запитання для самопідготовки:

1. Мікроскоп. Механічна та оптична системи.

2. Правила роботи з мікроскопом

3. Робоча відстань. Роздільна здатність. Загальне збільшення.

4. Клітина. Історія вивчення. Клітинна теорія

5. Відмінність рослинної клітини від грибної та тваринної

6. Будова клітини. Ядро, будова, функції.

7. Органоїди рослинної клітини. Будова, функції

8. Цитоплазма. Будова, функції

9. Вакуоля, будова, функції

Пояснення до завдань

мікроскоп.

Мікроскоп - оптико-механічна система, що дозволяє отримувати сильно збільшене зображення предметів, розміри яких лежать далеко за межами роздільної здатності неозброєного ока. Роздільна здатність ока 0,15 мм. Роздільна здатність світлових мікроскопів в 300-400 разів вище роздільної здатності неозброєного ока і дорівнює 0,1-0,3 мкм.

У мікроскопі розрізняють оптичну та механічну системи. Оптична система складається з освітлювального апарату, об'єктива та окуляра. Механічна система складається з револьвера, тубуса, штатива, предметного столика, макро та мікрогвинтів.

Освітлювальний апарат включає:

Конденсор (призначений для найкращого освітлення, регулювання різкості зображення);

Ірисову діафрагму (призначена для регулювання діаметра пучка світла та глибини поля зору);

Дзеркало (призначене для спрямування променів від джерела світла в конденсор).

Об'єктив є найбільш важливою частиною оптичної системи. Об'єктив дає зображення об'єкта зі зворотним розташуванням частин. При цьому він виявляє («дозволяє») структури, недоступні неозброєному оку.

Окуляр служить спостереження зображення, побудованого об'єктивом. Діафрагма окуляра визначає межі поля зору. Загалом, об'єктив і окуляр і забезпечують роздільну здатність мікроскопа і визначають загальне збільшення мікроскопа (загальне збільшення мікроскопа визначається, як добуток збільшення окуляра об'єктива).

Механічна система мікроскопа варта монтування частин оптичної системи.

Робота з мікроскопом

1. Мікроскоп встановити навпроти лівого плеча, звільнити місце для альбому. Поставити об'єктив у робоче становище. Про правильність установки об'єктива слід судити по клацанню, що відчувається при обертанні револьвера. Відстань між об'єктивом та предметним склом має бути близько 1 см. Роботу з мікроскопом завжди починають із малого збільшення.

2. Відкрити повністю діафрагму. Підняти конденсор рівня предметного столика. Навести світло за допомогою увігнутого дзеркала так, щоб усе поле було освітлене яскраво та рівномірно.

3. Приготовлений мікропрепарат покласти на предметний столик так, щоб один зрізів був розташований точно під об'єктивом. Для фіксації мікропрепарату предметне скло притиснути клемою.

4. За допомогою макрогвинта встановити необхідну фокусну відстань для отримання чіткого зображення у мікроскопі. Відкоригувати відстань мікрогвинтом.

5. Перед переведенням мікроскопа на збільшення вибрати потрібне місце зрізу, поставити його у центр поля зору, і лише після цього змінити об'єктиви шляхом обережного обертання револьвера.

6. Після закінчення роботи потрібно перевести мікроскоп на мале збільшення та прибрати мікропрепарат.

7. Після роботи мікроскоп слід закрити ковпаком для захисту або пилу.

Методика приготування тимчасових мікропрепаратів

1. Об'єкт необхідно взяти в ліву руку та затиснути трьома пальцями, у правій руці треба тримати безпечну бритву чи лезо.

2. Поверхню об'єкта вирівняти, щоб площина зрізу перпендикулярна осі органу. Зрізи роблять рухом бритви він.

3. На середину предметного скла нанести 2-3 краплі води і на кінчику препарувальної голки перенести найбільш тонкі зрізи, закрити об'єкт покривним склом. Рідина не повинна витікати з під покривного скла.

4. Приготовлений препарат покласти на предметний столик, розглянути за малого і великого збільшення.

5. Крім часових препаратів, для дослідження об'єктів використовують постійні препарати. Включає рідиною в них є гліцерин з желатиною або канадський бальзам.

6. При фарбуванні препарату слід врахувати, що під дією концентрованих кислот органічні включення в клітині можуть обуглитися, мінеральні включення (кристали, друзи, цистоліти) зовсім зникнути або змінити свою форму.

7. Не можна виймати препарат з-під об'єктива х40, т.к. робоча відстань його дорівнює 0,6 мм і можна зіпсувати фронтальну лінзу.

Клітина

Клітина - основна структурна та функціональна одиниця всього живого. Клітини вперше описав Роберт Гук у середині сімнадцятого століття (1665 р), розглядаючи шматочок пробки. Знання про клітину розширювалися із удосконаленням мікроскопа. До середини дев'ятнадцятого століття було накопичено достатньо знань про клітину - відкриття ядра, пластид, поділу клітин та ін Всі знання про клітину були узагальнені на рубежі 30-40х р. 19 століття ботаніком М. Шлейденом і зоологом Т.Шванном у вигляді клітинної теорії.

Основні тези (постулати) клітинної теорії:

1. клітина - структурна та функціональна одиниця всього живого;

2. багатоклітинний організм - це складно організована, інтегрована система, що складається з функціонуючих та взаємодіючих клітин;

3. всі клітини гомологічні за будовою;

4. "клітина від клітини". Принцип спадкоємності клітин шляхом поділу було засновано в 1958 р. німецьким ученим Р. Вірховим.

Форма, будова та розміри клітин дуже різноманітні. Рослинна клітина складається з протопласту, оболонки або клітинної стінки та вакуолі.

Протопластвключає: цитоплазму, ядро, пластиди, мітохондрії.

Цитоплазма- частина протопласту, укладена між плазмалемою та ядром. Основу цитоплазми становить її матрикс, або гіалоплазма- Складна, безбарвна колоїдна система. Найважливіша роль гіалоплазми полягає у поєднанні всіх клітинних структур у єдину систему, забезпеченні взаємодії між ними у процесах клітинного метаболізму. У цитоплазмі здійснюється більшість процесів клітинного метаболізму, крім синтезу нуклеїнових кислот.

Ядро- обов'язкова та головна частина живої клітини всіх еукаріотів. Функції ядра: зберігання та відтворення спадкової інформації, управління обміном речовин і багатьох процесів, що відбуваються в клітині, синтез нуклеїнових кислот, синтез білка. Ядро оточене оболонкою, що складається з двох мембран, що несуть дуже великі пори. Внутрішній вміст ядра називається ядерним соком або нуклеоплазмою. У ядерний сік занурено одне або кілька ядерців.

Мітохондріїорганоїди клітини, форма, величина і кількість яких постійно змінюються. Основна функція – забезпечення енергетичних потреб клітини шляхом окислення енергетично багатих речовин (цукорів) та синтезу АТФ та АДФ. Мітохондрії оточені двома мембранами, внутрішня утворює вирости – кристи. Мітохондрії, як і пластиди, напівавтономні органоїди, т.к. містять у матриксі ДНК та рибосоми.

Пластидихарактерні лише рослин. Розрізняють три типи пластид: хлоропласти, хромопласти та лейкопласти. Основна функція хлоропластів - фотосинтез, лейкопластів -запасування поживних речовин та хромопластів - забарвлення квітів та плодів. Хлоропласти складаються з подвійної мембрани, матриксу, тілакоїдів, об'єднаних у грани, ДНК, рибосом, зерен первинного крохмалю.

Комплекс Гольджі- система дископодібних мішечків та бульбашок, оточених мембранами. Виконує функції синтезу, накопичення та виділення деяких полісахаридів (пектинів, слизів та ін), вторинних метаболітів; утворення вакуолей та лізосом; розподілу та внутрішньоклітинного транспорту деяких білків; бере участь у побудові цитоплазматичної мембрани.

ЕПС (ендоплазматична мережа) -обмежена мембранами система субмікроскопічних каналів ЕПС поділяється на гладку та шорсткувату. Функції шорсткої ЕПС: синтез білків; спрямований транспорт макромолекул та іонів; утворення мембран; взаємодія органел. Функція гладкої ЕПС – синтез ліпофільних сполук.

Вакуоль- Порожнину в клітині, оточена мембраною (тонопластом), і заповнена клітинним соком. Клітинний сік є водним розчином різних речовин – продуктів життєдіяльності протопласта. Функції вакуолей: накопичення запасних речовин та шлаків; підтримка тургору клітини; регуляція водно-сольового балансу клітини

Клітинна стінкавідокремлює клітину від довкілля. Основу її складають молекули целюлози, які згруповані в мікрофібрили та фібрили. Молекули целюлози занурені в матрикс, який складається з полісахаридів, що мають більш розгалужену структуру - геміцелюлоз та пектинів, а також води. Клітинна стінка дуже міцна, і в той же час еластична. Міцність їй надають молекули целюлози, еластичність – матрикс. Клітинна стінка виконує формотворчу та механічну функції, забезпечує захист протопласту, протистоїть високому осмотичному тиску вакуолі, через клітинну стінку відбувається транспорт речовин.

мікроскоп.

У цій статті розповім 3 способи виготовлення препаратів для мікроскопа. Ці способи – найпростіші.

На початку статті – так званий словничок, а точніше пояснення, що таке той чи інший предмет.

Для виготовлення мікропрепаратів потрібен спеціальний інструмент, барвники, а також певна акуратність та вправність. Дуже важливим є суворе дотримання всіх необхідних умов – інакше мікропрепарат може виявитися непридатним для досліджень.

У продажу є готові набори препаратів для досліджень (що зручно для дому та школи) – наприклад, 25 препаратів, або 38 слайдів від Левенгуку. А також мінерали та інші набори.

Дивіться каталог мікроскопів.

пояснення

Фіксований препарат- У мікробіології часто готують саме фіксовані препарати, тому слід знати, що це таке. Ці препарати розглядають під мікроскопом саме у пофарбованому вигляді. Під словом "фіксація" мається на увазі така обробка живого об'єкта (який ви збираєтеся розглянути), яка дає можливість швидко перервати життєві процеси в тому чи іншому об'єкті (поясню простіше - вбити), при цьому зберігши тонку структуру. Внаслідок фіксації клітини міцно прикріплюються до скла і краще фарбуються. Фіксація необхідна у разі роботи з патогенними мікроорганізмами (з метою самобезпеки).

Суспензія- суміш будь-яких речовин, де тверда речовина розподілена у вигляді найдрібніших частинок у рідкій речовині в неосілому стані.

Біологічна петля- тонка металева паличка, на кінці тонка металева петля. Використовується для захоплення невеликої кількості тієї чи іншої суспензії мікроорганізмів.

Вазелін- мазеподібна рідина без запаху та смаку. Суміш складається з мінеральної олії та твердих парафінів (воскоподібна суміш).

Герметизація- забезпечення досконалої непроникності для різних газів та рідин поверхонь та місць з'єднання деталей.

Агар-агар- у мікробіології використовується для виготовлення щільних і напіврідких живильних середовищ, тобто агаризованих середовищ.

Рідина Карнуа- Рідина для фіксації.

Пальник- пристрій, що має інжектор, який встановлений у металевій трубці з отворами для надходження в цю трубку атмосферного повітря, яка закріплена на підставці з бічним введенням для подачі в трубку газу, при цьому отвори виконані на бічній поверхні трубки, на якій для зміни подачі повітря пальник, може бути встановлена ​​рухома заслінка, що змінює площу прохідного перерізу цих отворів.

Суміш Нікіфорова- суміш рівних обсягів етилового спирту та безводного сірчаного ефіру, застосовується для фіксації мазків крові, мазків-відбитків органів та будь-яких тканин.

Приготування препарату "роздавлена ​​крапля"

Приготування препарату "висяча крапля"

Висяча крапля.

1. Одну краплю суспензії мікроорганізмів (заздалегідь приготованої) за допомогою біологічної петлі обережно нанесіть на чисте покривне скло.
2. Переверніть покривне скло з краплею суспензії так, щоб крапля вільно висіла.
3. Помістіть перевернуте покривне скло з краплею над лункою спеціального покривного скла з заглибленням у центрі.
4. Крапля не повинна торкатися країв скла та поглиблення (лунки), вона повинна вільно висіти на покривному склі.
5. Краї заглиблення спеціального покривного скла попередньо змащують вазеліном для герметизації камери.
6. Насолоджуйтесь наглядом за бактеріями у мікропрепараті!

Приготування препарату "відбиток"

З агаризованого середовища, на якому будь-які мікроорганізми ростуть абсолютним суцільним газоном або ж у вигляді окремих колоній, акуратно виріжете скальпелем невеликий кубик.

Перенесіть його на предметне скло таким чином, щоб поверхня кубика з мікроорганізмами була звернена вгору.

Потім до газону мікроорганізмів або колонії прикладіть звичайне покривне скло (абсолютно чисте), акуратно і не сильно, а злегка, натисніть на нього біологічною петлею або пінцетом і відразу зніміть, намагаючись не зрушити його в бік.

Отриманий препарат (покривне скло з відбитком) поміщають саме відбитком донизу в краплю звичайної води на чисте предметне скло. Відбиток також можна отримати на предметному склі, якщо торкатися поверхні колонії предметним склом.

1. Препарат готовий!
2. Увага!Препарати живих клітин розглядають за допомогою "сухих систем" мікроскопа. Після мікроскопування такі препарати перед миттям мають бути витримані в дезрозчині (засоб, що дезінфікує).

Приготування препарату "відбиток", інший спосіб

Приготування препарату "фіксований мазок"

Для того щоб приготувати цей препарат, потрібно на знежирене предметне скло нанести одну краплю води.

У неї біологічною петлею внесіть досліджуваний вами матеріал і розподіліть його так, щоб отримати тонкий і рівномірний мазок діаметром приблизно 1-1,5 сантиметра (тільки за такого розподілу матеріалу в мазку можна побачити ізольовані бактеріальні клітини).

Якщо матеріал, що досліджується, міститься в рідкому середовищі, то петлею його безпосередньо наносять на предметне скло і готують мазок. Мазки висушують на повітрі або в струмені теплого повітря над полум'ям пальника.


Для фіксації мазка предметне скло (саме мазком догори) дуже акуратно і повільно проводять 3 рази (протягом 3 секунд) через полум'я пальника. Мікроорганізми, що знаходяться в мазку, при фіксації гинуть, щільно прикріплюючись до поверхні предметного скла, і вони не змиваються при подальшій обробці препарату.

1. Готово!

Увага!Більше тривале нагрівання може викликати деформацію структур клітин. Мазки крові, мазки-відбитки органів та будь-яких тканин і (у деяких випадках і мазки з культур), фіксують зануренням на 5-20 хвилин у метиловий синій або етиловий спирт, суміш Нікіфорова, також сулемовий спирт або інші фіксуючі рідини.

Приклади мікропрепаратів для мікроскопа

Список мікропрепаратів набору на 25 слайдів від WSBD World:

Loose Connective Tissue Пухка волокниста сполучна тканина
Spinal Cord c.s. Поперечний зріз спинного мозку
Motor Nerve Ending Нервові клітинні закінчення (нейрони)
Stomach Mammal Sec. Зріз тканини шлунка ссавця
Kidney c.s. Поперечний зріз нирки
Artery & Vein c.s. Поперечний зріз вени та артерії
Blood Vessel of Lung Зріз кровоносної судини легені
Blood Vessel of kidney Зріз кровоносної судини нирки
Tase Bud Смаковий рецептор
Mouth Smear Мазок зі слизової порожнини рота
Human Sperm Smear Мазок людської сперми
Mitosis of Animal Cell Мітоз клітини тварини
Hydra thru Testis c.s. Насінник гідри
Hydra thru Ovary c.s. Яєчник гідри
Hydra with Bud Гідра з відростком
Fern Prothalium wm Заросток папороті
Zea Mays Seed l.s. Зріз насіння кукурудзи
Spirogyra Спирогіра
Lung Mammal Легке ссавця
Colon Mammal Товста кишка ссавця
Trachea Mammal Трахея ссавця
Pancreas Mammal Підшлункова залоза ссавця
Uterus Mammal Матка ссавця
Spleen Mammal Селезінка ссавця
Onion Root Tips Кореневі кінчики цибулі

Вміст іншого набору (38 штук) - Levenhuk N38 NG набір готових мікропрепаратів:

Ботаніка та зоологія:

Шкірка цибулі
Зернівка жита
Кореневий чохлик
Гілка липи
Пильовик
Зав'язь
Камелія
Епідерміс листа герані
Кінцівка бджоли
Крило бджоли
Циклоп
Вольвокс
Евглена
Інфузорія туфелька
Дощовий черв'як (поперечний зріз)
Ротовий апарат комара
Аскарида
Дафнії

Біологія та фізіологія:

Мутація дрозофіли (безкрила форма)
Мутація дрозофіли (чорне тіло)
Дрозофіла "норма"
Тваринна клітина
Рослинна клітина
Цвіль мукор
Дроблення яйцеклітини
Мітоз у корінці цибулі
Поперечно-смугасті м'язи
Сперматазоїди ссавця
Нерв (поперечний зріз)
Пухка сполучна тканина
Яйцеклітина ссавця
Нервові клітини
Гіаліновий хрящ
Гладкі м'язи
Кісткова тканина
Кров жаби
Кров людини
Одношаровий епітелій